熒光顯微鏡是利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源,經(jīng)過(guò)濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光(如紫外光3650入或紫藍(lán)光4200入)作為激發(fā)光、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,再通過(guò)物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察。這樣在強(qiáng)烈的對(duì)襯背景下,即使熒光很微弱也易辨認(rèn),敏感性高,主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究。
熒光顯微鏡的基本構(gòu)造是由普通光學(xué)顯微鏡加上一些附件(如熒光光源、激發(fā)濾片、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎(chǔ)上組成的。熒光光源——般采用超高壓汞燈(50一200W),它可發(fā)出各種波長(zhǎng)的光,但每種熒光物質(zhì)都有一個(gè)產(chǎn)生*強(qiáng)熒光的激發(fā)光波長(zhǎng),所以需加用激發(fā)濾片(一般有紫外、紫色、藍(lán)色和綠色激發(fā)濾片),僅使一定波長(zhǎng)的激發(fā)光透過(guò)照射到標(biāo)本上,而將其他光都吸收掉。每種物質(zhì)被激發(fā)光照射后,在極短時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射波長(zhǎng)更長(zhǎng)的可見(jiàn)熒光。熒光具有專一性,一般都比激發(fā)光弱,為能觀察到專一的熒光,在物鏡后面需加阻斷(或壓制)濾光片。
熒光顯微鏡使用注意事項(xiàng):
1、嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作,不要隨意改變程序。
2、應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后,接上電源,點(diǎn)燃超高壓汞燈5~15min,待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后,眼睛*適應(yīng)暗室,再開(kāi)始觀察標(biāo)本。
3、防止紫外線對(duì)眼睛的損害,在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。
4、檢查時(shí)間每次以1~2h為宜,超過(guò)90min,超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降,熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后,熒光也明顯減弱;所以,Z多不得超過(guò)2~3h。
5、光源壽命有限,標(biāo)本應(yīng)集中檢查,以節(jié)省時(shí)間,保護(hù)光源。天熱時(shí),應(yīng)加電扇散熱降溫,新?lián)Q燈泡應(yīng)從開(kāi)始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再用時(shí),須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。
6、標(biāo)本染色后立即觀察,因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中保存,可延緩熒光減弱時(shí)間,防止封裱劑蒸發(fā)。
7、熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn):一般分為四級(jí),即“-”表示無(wú)或可見(jiàn)微弱熒光。“+”表示僅能見(jiàn)明確可見(jiàn)的熒光。“++”表示可見(jiàn)有明亮的熒光。“+++”表示可見(jiàn)耀眼的熒光。